免疫組庫(Immune Repertoire,IR)是指某個個體在任何特定時間點其循環(huán)系統(tǒng)中所有功能多樣性B淋巴細胞和T淋巴細胞的總和。T細胞和B細胞分別介導機體的細胞免疫和體液免疫應答,分別通過其表面的T細胞受體(TCR)和 B細胞受體(BCR)來識別和結合抗原,進而發(fā)揮功能清除病原體或體內腫瘤細胞。
免疫組庫高通量測序是通過多重PCR或SMART RACE法擴增TCR/BCR全長或CDR3區(qū)序列(主要是TCR的β鏈或BCR的重鏈),再結合高通量測序技術,對機體免疫組庫的多樣性及每種 T、B細胞克隆的獨特性序列組成和變化進行分析,從而全面評估機體的免疫狀態(tài),明確疾病與T、B細胞克隆組成及變化之間的關系。隨著免疫組庫高通量測序技術的不斷發(fā)展和成熟,基于免疫組庫多樣性變化特點的生物標志物發(fā)現、腫瘤等疾病療效預測、疾病的易感性和抵抗性、感染性疾病及疫苗研究等方面都取得了重要進展。
數據量:1G raw date/樣
(5) 如果客戶自提 RNA,建議最好用進口試劑或試劑盒提取,最后溶于無RNA酶的水中。如果是分離的PBMC,RNA濃度大于50ng/μL,總量大于500ng。如果用組織提 RNA,濃度>500ng/μL,總量>5μg。
(5)運用國際認可的專業(yè)的免疫組庫分析模塊,并結合我們自己獨有的生物信息分析算法,所提供的標準化的分析流程即可滿足科研或臨床所需。另外我們還可提供數據的深度分析服務(需另收費).
(9)樣本間共有克隆分析
RNA提取和質檢-SMART RACE法擴增-文庫構建-上機測序-標準信息分析-高級信息分析
T淋巴細胞通過特異性T細胞受體(TCR)識別抗原肽,在人類適應性免疫應答中扮演著重要角色。TCR多樣性與宿主免疫反應及腫瘤預后密切相關。盡管腫瘤浸潤性T淋巴細胞對腫瘤預后有一定的影響,但很少有研究對乙型肝炎病毒(HBV)相關肝細胞癌(HCC)中的腫瘤組織和非腫瘤組織中的TCR多樣性進行詳細地特性描述。本研究對來自48位HBV相關HCC患者的肝癌腫瘤組織進行免疫組庫測序。與癌旁組織相比,腫瘤組織CDR3氨基酸(aa)克隆型具有顯著較高的平均數(2259 vs.1324,p<0.001),TCR多樣性顯著升高(Gini協(xié)同系數,p<0.001;Simpson指數,p<0.01;Shannon熵,p<0.001)。對中央Morisita-Horn相似指數(MHSI)的分析顯示,在腫瘤組織與癌旁組織之間TCR庫相似性較弱。本研究在肝癌患者腫瘤中觀察到T淋巴細胞具有廣泛的異質性,以及在相鄰癌旁組織中有較高的HEC。腫瘤組織和癌旁組織中差異化T細胞庫顯示了乙肝相關性肝癌患者體內獨特的T細胞免疫微環(huán)境。
圖2 CDR3 aa克隆類型多樣性的分析
拉斯穆森腦炎(Rasmussen encephalitis, RE)是一種罕見的兒科癲癇疾病伴隨有半腦炎癥和進行性神經系統(tǒng)缺陷。為了闡明RE的免疫反應過程,德國明斯克大學神經學研究所對RE患者的22例血液,2例腦脊液,和5例腦組織切片樣本還有兒科樣本參照進行T細胞受體(TCR)測序。RE患者樣本表現為外周CD8+T細胞的擴散程度與疾病的嚴重程度相關。此外,在CNS中,RE是唯一的具有T細胞擴散的兒科癲癇疾病。同時提示在RE中,外周擴散的CD8+淋巴細胞的抗原特異性會侵害CNS,可通過限制其進入CNS來改善。
適應性免疫系統(tǒng)的保護機體的能力是需要不同的淋巴細胞抗原受體完成的。然而個體差異基因和后天因素導致的差異和影響還沒有被完全闡釋。斯坦福大學醫(yī)學院通過對5對同卵雙生雙胞胎的B、CD4+ T和CD8+ T淋巴細胞進行分析,來量化遺傳因素在V(D)J重組過程和胸腺選擇中的影響。選取PBMC進行RNA提取后利用反轉錄獲得目的片段并構建免疫組文庫,使用Miseq進行2x300 bp測序,最后分析免疫組庫的差異性。